发布时间：2023-09-28 08:54:17
绪论：一篇引人入胜的医学影像的危害，需要建立在充分的资料搜集和文献研究之上。搜杂志网为您汇编了三篇范文，供您参考和学习。
方法：实验用4血管阻断模型，用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力，并用电镜观察鼠脑海马神经元的超微结构变化。
结果：模型大鼠表现明显的学习记忆障碍，逃避潜伏期显著延长；在原平台象限跨越平台次数未明显高于其余3个象限；海马神经元超微结构发生明显改变，神经元损害严重。电针及尼莫通组能显著缩短定位航行试验的逃避潜伏期；在原平台象限跨越平台次数显著多于其余3个象限，与假手术组比无显著差异；海马神经元超微结构变化相对较轻，神经元受损程度明显轻于模型组。
［主题词］ 电针；海马／超微结构；学习／针灸效应；记忆／针灸效应；脑缺血／针灸疗法
EffectsofElectroacupunctureonLearningandMemoryAbilityandUltrastruct
uresofHippocampusNeuronsinRatsofWholeCerebralIschemiaWangLi，
LaiXinsheng，LeiWeiwei（GuangzhouUniversityofTCM，Guangdong5104
07，China）［Abstract］ Purpose
Toobserveeffectsofelectroacupuncture（EA）
onlearningandmemoryabilityandneuronsofhip
pocampusintheratofvasculardementia（VD）．Methods
Infourvesselsocclusion（4vo）modelrats，
Morriswatermazetestswereusedforbehaviouralstudy．
Ultrastructuralchangesofneuronsinhippocampuswereobservedwithtransmi
ssionelectronmicroscope．Results
Themodelanimalsneededmoreescapetime（latency）
thanthecontrolanimalsinplacenavigationtest，
andtheydidnotswimmoretimesinplatformquadrantthanintheothersinspatia
lprobetest．Theultra
structureofneuronsinhippocampuswerealteredobviouslyanddamagedsevere
ly．IntheEAgroupandNimotongroup，
thelatencieswerenotdifferentfromcontrolgroupratsinplacenavigationte
standinthespatialprobetest，
thetwogroupsratsswammoretimesinplatformquadrantthaninotherthreequad
rants．Comparedwiththemodelgroup，
thedamageoftheneuronsofhippocampusintheEAandNimotongroupswasobvious
lyslight．Conclusion
EAcanimprovelearningandmemoryabilityinVDmodelrats，
anditcanalsoimprovemarkedlyultrastracturalalterationofneuronsinbrai
n，inhibitingthedemageofneurons．
［Keywords］ Electroacupuncture；Hippocampus／ultrastr；
Learning／acupeff；Memory／acupeff；CerebralIschemia／acupther
血管性痴呆（VascularDementia，VD）是指各种脑血管疾病引起的脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合征。学习记忆能力的下降，通常是痴呆的早期表现。目前较为普遍的观点认为，主要是由于多梗塞后对某些中枢结构的损害以及影响了中枢之间的联系而导致痴呆。针灸疗法对VD的智能及社会活动能力康复有积极作用，能明显提高患者的学习记忆能力，但有关机理方面的动物实验研究尚缺乏［1］。为探索针刺治疗VD的疗效和可能机制，我们采用4血管阻断（4Vesselocclusion，4VO）全脑缺血法，建立近似人类学习记忆障碍的大鼠模型，用水迷宫定量测量治疗与非治疗组之间学习记忆能力的差异，并观察鼠脑海马神经元超微结构的变化，为针灸临床防治VD提供实验室依据。
1 材料
1.1 动物及分组成年健康雄性SD大鼠50只，体重200～250g，由广州中医药大学实验动物研究中心提供。模型制作存活大鼠按体重随机分为假手术组、电针组、尼膜通组各10只，模型组11只。
1.2 仪器SDQ30双极射频电凝器（上海手术器械厂），Morris水迷宫，JEM1200EX电子显微镜（日本），D860电针仪（上海）。
1.3 药品尼莫通，由德国拜耳公司提供，批号：CAGFT3。
2 方法
2.1 模型制作方法模型组、电针组、尼膜通组动物按4血管阻断（4Vesselocclusion，4VO）方法制作模型。用10％水合氯醛（0.3ml／100g体重）腹腔麻醉大鼠，背侧颈正中切口，暴露双侧第一颈椎横突翼小孔，用直径0.5mm电凝针插入双侧翼小孔烧灼双侧椎动脉，造成永久性闭塞。24h后腹侧颈正中切口，分离双侧椎动脉，用微动脉夹可逆性夹闭颈总动脉5min，共夹闭3次，每次间隔1h，常规饲养、观察。假手术组手术程序同上，仅暴露4条血管，不发生脑缺血，常规饲养。
2.2 治疗方法术后7天，刀口完全愈合，饮食正常，无肢体残疾，开始给予治疗。
（1）电针组：用28号1寸毫针，于模型大鼠头部“百会”穴斜刺0.5寸、“大椎”穴直刺0.5寸［2］（取穴参照林文注等编著的《实验针灸学》），连接电针仪，施以连续波，频率150Hz，强度以大鼠安静耐受为度（约2.0mA），于每天电针1次，留针20min，连续治疗10天。
（2）尼莫通组：大鼠给予尼莫通12mg／kg（将10片共300mg尼莫通先用少量的吐温80混悬，再加蒸馏水至500ml，即为0.6mg／ml的尼莫通混悬液），按20ml／kg体重灌胃，每日1次，连续10天。
（3）假手术组和模型组未予任何治疗。
2.3 检测方法（1）Morris水迷宫［2］行为学检测水迷宫由直径130cm、高50cm水池组成，水深30cm，水温26±1℃。在水池壁标明4个入水点，由此将水池等份为4个象限，任一象限正中放置一个直径12cm、高29cm无色透明的平台，没于水下1cm，水面覆盖塑料泡沫，于术后第18天开始水迷宫试验。程序包括①定位航行试验（placetest），历时6天，每天上下午各4次，将大鼠从四个入水点面向池壁放入水中，记录2min内寻找平台的时间（逃避潜伏期，escapelatency）；②空间探索试验（spatialprobetest）：定位航行试验结束后撤除平台，然后将鼠任选一入水点放入水中，测其2min内跨原平台及其余3个象限相应平台位置的次数和大鼠在水迷宫外环停留时间。
（2）海马神经元超微结构检测随机取各组大鼠5只，6％水合氯醛（0.3ml／100g体重）大鼠腹腔注射麻醉，暴露心脏，先以生理盐水100ml经主动脉冲洗，继灌注由4％多聚甲醛与1％戊二醛组成的磷酸缓冲液（PH值7.4）约200ml，再持续滴注40min，取脑，分离并留取海马，常规电镜制样，Epon812包埋，超薄切片，透射电镜观察。
3 结果
3.1 行为学检测结果测试时大鼠饮食正常，体重恢复到原有水平，无肢体残疾。
（1）定位航行试验4组大鼠在历时6天训练中寻找平台的平均潜伏期变化见表1。
表1 各组大鼠平均逃避潜伏期
从表1可以看到，假手术组、电针组、尼莫通组平均逃避潜伏期明显短于模型组，这表明模型组大鼠学习获取能力较差。将4组大鼠平均潜伏期进行组间单因素方差分析，差异有非常显著性意义（P＜0.01），并作组间两两比较，结果显示电针组大鼠平均潜伏期明显短于模型组（P＜0.01），而假手术组和尼莫通组与电针组之间的差异无显著性意义（P＞0.05），这表明电针能够改善模型大鼠的学习巩固和再现能力。
（2）空间探索试验撤除平台，四组大鼠2min内跨越原平台及其余3个象限相应平台位置次数。
假手术组大鼠在原平台象限跨相应平台次数为6.30次，其余右侧、对侧、左侧3个象限跨相应平台次数分别为0.90，1.10，2.30；电针组大鼠在原平台象限跨相应平台次数为5.40次，其余右侧、对侧、左侧3个象限跨相应平台次数分别为1.00，0.7，1.50；尼莫通组大鼠在原平台象限跨相应平台次数为5.30次，其余右侧、对侧、左侧3个象限跨相应 平台次数分别为1.30，0.60，1.70，3组大鼠在原平台象限跨相应平台次数明显多于其余3个象限（P＜0.01）。模型组在原平台象限跨越相应平台次数为2.67次，另外3个象限分别为2.44，3.00，1.89，4个象限无显著差异（P＞0.05）。将4组大鼠在原平台象限跨越相应平台次数作两两比较，电针组明显多于模型组（P＜0.01），与尼莫通组和假手术组相比，差异无显著意义（P＞0.05）。在水迷宫外环逗留时间假手术组平均为40.3秒，电针组为40.4秒，尼莫通组为47.5秒，模型组为75.8秒，模型组逗留时间比其它3组明显延长（P＜0.05）。
3.2 海马神经元超微结构变化假手术组神经元的细胞核（N）呈卵圆形，两层膜（）结构清晰、光滑，核周间隙均匀，核内染色质（Ch）均匀分布；胞浆内细胞器丰富，结构完整，可见高尔基氏器（Go）分布，结构呈扁平囊泡平行排列；线粒体（Mi）呈圆形、椭圆形，内嵴清晰可见，基质均匀；粗面内质网（RER）集核周平行排列或散在分布；见少量脂褐素（Lic）；大量糖原颗粒（Gl）存在于胞浆中。参见图1。
模型组神经元固缩或肿胀，细胞轮廓模糊，核膜（）内陷，锯齿样变，核周间隙扩张或消失；染色质（Ch）凝集成块状或溶解；核周围细胞器减少、崩解、消失，胞浆高尔基体（Go）肿胀呈泡状；线粒体（Mi）肿胀、嵴断裂，部分线粒体内嵴溶解消失，透明成空泡；粗面内质网（RER）扩张，表面核糖体脱落，出现大量脂褐素（Lic）沉积；局部有水肿空白区域（）。参见图2。
针刺组与尼莫通组神经细胞组织异常改变明显改善。针刺组核膜完整（），染色质（Ch）均匀，胞浆内细胞器丰富；仅偶见内质网（RER）肿胀，有少量线粒体（Mi）空泡样变化尚未恢复正常，脂褐素（Lic）较多。神经元的损伤虽未完全恢复如假手术组，但较模型组明显减轻，多数神经细胞未见不可逆性损害。尼莫通组仍有部分核膜内陷（），少量染色质（Ch）凝集，核周部分内质网（RER）及高尔基氏体（Go）肿胀，线粒体（Mi）虽未见空泡样变化，嵴断裂仍存在，可见针刺组对神经元的改善作用优于尼莫通组。参见图3与图4。
图1假手术组×12K图2模型组×12K图3电针组×12K图4尼莫通组×12K
4 讨论
本实验采取被广泛应用的4血管阻断法（4VO），引起全脑缺血，其中再灌注损伤和人类因脑血管疾病引起学习记忆能力障碍有很大的相似性。实验结果表明，缺血再灌注损伤后，模型组动物出现明显记忆障碍。而电针组检测其学习记忆行为结果显示，能缩短模型大鼠逃避至平台的潜伏期，并能增加在原平台象限的跨越次数，说明电针能改善全脑缺血大鼠的学习记忆成绩。通过电镜下对海马神经元超微结构的观察，结果显示，电针组比模型组神经元的超微结构变化得到了明显的改善，电针具有保护缺血大鼠脑神经细胞损害的趋势。
百会和大椎均为督脉穴位，百会为“三阳五会”，大椎为“诸阳之会”，督脉与脑密切相关，督脉通于脑，病变在脑，首取督脉。电针2穴，能疏通经络、调节平衡、醒脑开窍、益智复聪。学习记忆属于脑的高级神经活动，而神经元是神经系统功能活动的基本单位。本实验表明针刺疗法对神经系统具有特殊的调节作用，能拮抗神经元的进一步损害，电针明显改善痴呆大鼠的学习记忆能力，与其对脑组织神经元的保护作用密切相关。
尼莫通是目前为止发现的选择性扩张脑血管作用最强的钙通道阻滞剂，进入脑组织后能高度特异性地和海马、皮质的神经元以及大脑内参与学习和记忆区域的钙通道受体结合，相互调节钙离子流入神经细胞，从而影响神经元电学性质及神经介质的平衡，选择性抑制去极化时产生的钙离子过量流入，同时扩张脑血管，增加脑血液的供应，防止缺血状态下对脑细胞带来的损伤，使其保持正常的生理功能，是近年来常用于治疗VD的西药。本动物实验表明，电针和尼莫通对痴呆大鼠记忆障碍及神经元超微结构显著改善作用，显示出针刺治疗VD的潜力，也向我们提示针刺对神经元的保护作用是否与调节脑缺血状态下细胞内钙离子有关。因此，可以设想针刺对VD的治疗可能是具有多系统、多水平、多层次、多靶点的特色，其有关机理需待进一步深入研究。
5 参考文献
基本理念
“转换思路，以人为本，深入应用，创新实践”是该模式的基本理念。在运作过程中，其建设思路从“建设导向”转变为“应用导向”，信息化软件以及项目“应用”成为信息化建设的核心要素。发展的核心从以硬件设备和软件平台等“物”为中心转变为以学生和教师等“人”为中心；从关注基础设施的信息化，到关注教育技术的关键性应用。为了避免做出不切实际的决策，基础教育学校在区域信息化管理机构的鼓励下，逐步开展自主建设、探索应用和个性化发展。区教育信息化管理中心抛弃了以往的“统一标准”，这一举动激发了学校自主建设的积极性，使得学校的建设更加符合本校的发展特色，信息化资金实现了充分利用、设备实现了“物尽其用”，整体的发展较以前更加充满活力。其中，“自主”是在符合国家和区域整体规划指导前提下的自主，因此学校的发展仍然需要海淀区教育信息中心为学校提供指导。
学校分析本校的实际情况，“以需求拉动规划，以应用促进教学”，坚持“学生本位，所有的技术都要为学生的学习服务”，促进以演示、讲授为主的低层次信息化教学应用向信息技术作为学习工具、认知工具、资源工具、评价工具等高层次应用转变，从而促进教学方式和学习方式的变革，形成了“应用为导向”的基础教育信息化自主建设模式。符合这一模式的学校具有超前的硬件基础设施，随时可以调配资金，根据需要购置硬件设备、软件系统，在应用数字化工具变革课堂教学方式、开展数字化教研、优化教学管理方面具有丰富的实践经验。
核心特征
1．应用数字化工具改变课堂教学方式
传统课堂中，教师与学生很少有交互行为的发生。教学基本上由课前预习、课上讲授、课下复习和完成作业四步组成。课上主要是听讲，由于客观条件的限制，如人数过多、环境嘈杂等，即使学生想要反馈信息或者有自己的想法想要和教师交流，得到的机会也是有限的。教育信息化的到来最先改变的一定是课堂教学：学生不再处于被动接受的地位；师生之间和生生之间的交流互动变得非常方便；教师能够及时地获得学生的反馈，调整教学过程；学生的学习从被动接受到互动交流；信息接收方式更加多元。
2．信息技术的应用催生数字化教研
教研是教师以真实的教学和学生的学习为基础，对教材和教学方法进行研究，对于教师提高专业能力、分享经验发挥着重要的作用。过去听课教师要和授课教师、学生同时坐在同一间教室里，完成听课、笔记活动，然后另外找时间进行交流、研讨。教研活动往往被生硬地分割为几个部分，时间上的断裂导致很多好的想法得不到及时的交流，好的想法就在拖延中流失了。数字化的校园催生了数字化的教研活动，教研活动的方式发生了变革，从原来的“模式单一，费时低效”变为了“方式多元，开放互动”。借助网络平台，教师不必到教室中去听课，听课教师的数量也不受教室大小的限制，实现“一边听课，一边研讨”，教师之间的及时交流对提高教研效率以及教师信息技术素养起到了重要作用。
3．信息化实现教学管理方式变革
学校管理信息化是学校发展的重要推动力。网络融入学校管理解决了“一校多址”的管理难题，提高了管理的效率，同时降低了管理的成本费用；FTP是学校管理、教师交流分享的平台，同时又是一个巨大的资源库，提供教师教学资源的下载、分享和使用，避免了资源无法流通、重复建设的问题，为实现无纸化办公奠定了坚实的基础。信息化的办公方式方便对教学工作统筹安排和教师的分工协作，对多单位协调工作非常有帮助，从而实现了费时低效到省时高效的转变，提高了学校管理和教学管理的效率。
4．超前的硬件基础设施
硬件环境是学校教育现代化的基础，因此，在硬件建设上，学校的经费投入非常充足，学校顶层的支持使得信息化发展阔步前进，在购置设备上能够走在技术发展的前沿，保证了新的信息技术在教育教学中的应用。在应用上，学校能够充分利用购得的设备服务于自己的教育教学，充分挖掘已有设备的特点和优势，培养学生的兴趣爱好、提升学生的信息素养、促进学科课程的教学、辅助教师教学管理和教学研究等。对于在教育教学过程中产生的对新技术、新设备的需求，学校会尽力满足一线教师的需要，按需购置、合理配备，提升硬件的利用率，让硬件设备在应用中体现其价值，实现产出的最大化。
运作模式
1. 建立运行机制，谋划发展策略
为了适应信息时代的组织，加强对教育信息化建设的宏观指导与协调，学校将重要的决策从行政管理转向学校管理，成立了由校领导及相关部门负责人组成的信息化领导小组，针对学校信息化发展需求，按照学校的办学方针，设计、指导、实施和实践教育信息化过程。信息化建设合力的形成使得决策更加科学、运行机制更加完善。在谋划发展策略的过程中，坚持信息化环境与人的融合，处处体现“以学生为本”的宗旨。细化分级目标以支持不同类型学习，促使技术的应用从以“物”为中心的低层次发展形态向以“人”为中心的高层次发展形态转变；促进教师和学生的全面发展，弥合不同群体的优势与弱势，使教育信息系统处于一种稳定和平衡的状态。
2．建设可持续发展的信息化“生态校园”
从教育生态学的视角来看，一种新兴的技术形态进入教育系统，必然要与教育系统中原有各个要素之间或相互竞争或协调共生，并最终达到一种新的生态平衡。为了使信息化建设的成果在教育领域持续发挥作用，学校从宏观层面进行了系统的设计和规划，设计开发相应的平台、软件、资源等，引入相关的专家人才队伍进行培训指导，制定相应的培训计划，建立相应的管理和使用制度，这些建设之初的整体考虑和精心设计为信息化的可持续发展奠定了坚实的基础。在建设的过程中，一方面充分考虑现有软硬件基础设施，物尽其用；另一方面，挖掘学生发展中出现的新需求，确定目标，分析条件，制订方案，综合评价，优化方案，实施建设，并建立实施中的检查、监督、反馈、评价等制度，最终形成了两条线同步建设、螺旋上升的生态系统建设过程。
3．搭建共享平台，整合推送优质教育资源
首先，以数据库作为支撑，建立开放共享的网络资源平台。通过此平台，教师、学生可以根据自己的个性需求，通过Web方式，浏览、查询、下载、使用和上传资源，实现了教师与教师、教师与学生、学生与学生之间在教学资源上的交流互动。其次，以课程建设为重点，以持续更新的方式建设和推送可多次应用的多媒体教学资源。学科教师和技术人员共同设计和研发特色鲜明，符合国家建设规范的质量高效果好的课程文件、课件库、课程库、教材库、名师库、试题库、文献库、案例库等数字化教育资源。优质资源的建设实现了以“教”为中心向以“学”为中心的转变，在辅助教师教的同时支持学生的自主学习。
4．跨学科跨部门倾力协作
学校的信息化建设不是一个部门或者几个部门的事情，而是全校各个部门通力协作的事情，需要学校领导、教师、技术人员的群策群力。由于信息化是一项非常昂贵的学校变革，因此需要有校领导的鼎力支持才能够迈开步子发展。以“应用为导向”的基础教育信息化发展模式，在工作职能上采取成立电教中心和信息中心，共同负责、协调配合的组织形式。针对具体到信息化建设项目上的事情时，一般都是由学校的领导牵头，成立一个由有关各方组成的项目小组，一方面可以很好地把握用户需求，另一方面可以调动大家工作的积极性，使信息化建设真正落到实处。
问题与建议
1.缺少专业的信息化研究团队
学校的信息化工作人员基本上都是学校的技术人员，如信息技术教师、电教人员等，没有形成专业的研究队伍，在应用信息技术服务教育教学以及进行学校信息化管理方面存在技术和理念上的不足，对于持续提升学校信息技术应用能力是十分不利的。虽然每年都有许多提升教师信息技术能力的培训，但只是解决了教师利用信息化基础设施的问题，基础教育信息化应用过程中要求教师具备一定的理念和认识，“软实力”还有待挖掘。学科教师并不能够代替专职的研究人员，他们在信息化的专业素养上通常达不到深层次应用信息技术的要求，因此建设专业的信息化研究团队的任务迫在眉睫。
2.教学资源的特色化和个性化有待凸显
在信息化建设过程中，以应用为导向的学校对教学资源的建设和应用非常重视。以人大附中和北京一零一中学为例，他们在建设教学资源上具有很好的模范作用，学校在满足自身对教学资源需求的基础上，实现了教育资源的共享，向那些不具备自主建设教育资源能力的学校，以及资源建设能力不强的学校提供资源支持，他们的努力和贡献应当得到我们的肯定。但是，这也带来一个问题，即资源内容与形式的单一，不能满足不同学校、不同教师的个性化教学实践。教师往往身边拥有大量现成的教学资源，但“特色资源”却捉襟见肘。
3.建议建设专业的信息化发展研究团队，提升学校的信息化建设研究水平
学校依据自身的实际情况，建立一支专业的信息化发展研究团队，配备专职的研究人员，研究和探索符合学校自身特色的信息化发展道路。特色的信息化发展需要研究人员了解自己学校的特色、学校的发展状况等，因此在组建信息化发展研究团队时，应当首先考虑那些了解学校实际情况、愿意应用信息技术完善学校原有教学方式和管理方式的人员。例如，可以从校内筛选有经验的教师，对其进行专业培训，提高其从事信息化发展研究的素养。
4.创新教师培养的手段、内容与方法
教师培训的形式单一造成了许多问题，如教师培训的周期过长造成教师通过培训获得的技能并不能与技术的更新换代同步发展。在发展过程中，以应用为导向的学校对教师的信息素养要求较高，可以采用多种方式进行教师培训，避免单一的讲座式培训；提高教师培训的效率，帮助教师的知识跟上技术更新换代的步伐。可以运用信息化的远程教育平台，扩大教师培训的规模和力度，增加教师培训的频度和效度，注重提高每位参加培训的教师的自身水平和素质，而且要带动本校、校际之间的教育信息化培训，采取互相帮扶、资源与方法共享的方式，使教师培训走向常态化和优质化。同时，教师培训标准、培训内容的制定，培训效果的评价以及制度保障建设等也要跟进。
5.校际之间既有资源共享联盟，同时又建设具有学校特色的教学资源
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.012
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）07-0049-05
Abstract： Objective To investigate the intervention effects of Yinao Jieyu Prescription on the behaviors and damages in hippocampal CA1 area of the rats with post-stroke depression （PSD）. Methods Totally 168 SPF male SD rats were randomly divided into normal group， sham-operation group， stroke group， PSD group， Western medicine group and TCM group. There were 24 rats in the normal group and sham-operation group， and 30 rats in the other groups. Rats in the normal group received no intervention. Rats in the sham-operation group received no suture. Rats in the stroke group were given middle cerebral artery occlusion operation and normally fed after operation. Rats in the PSD group， Western medicinal group and TCM group were made into PSD models by chronic immobilization stress for one week and individual battery to the end. At the inception of modeling， Western medicine group received fluoxetine hydrochloride for gavage； TCM group received Yinao Jieyu Prescription for gavage； other groups received distilled water for gavage， once a day. At the end of week 2， 4， and 8， the morphology of the hippocampal CA1 area in each rat was observed by microscope after HE stained. Results Except for the week 2， at the same time point， the behavior scores of the rats in the TCM group were higher than those in the PSD group. At the same time point， the CA1 region of the hippocampus in the TCM group was more complete than the PSD group， and the cells were arranged neatly and in normal morphology. Conclusion Yinao Jieyu Prescription can improve the symptoms of PSD rats， and has protective effects on hippocampal CA1 area.
Key words： Yinao Jieyu Prescription； post-stroke depression； behaviors； hippocampal CA1 area； rats
卒中后抑郁（post-stroke depression，PSD）是R床脑卒中后常见并发症，主要表现为情绪低落、思维迟滞、兴趣减退及社会角色的紊乱等。我国每年大约有160万～200万新发脑卒中患者，约1/3存活患者发生PSD[1-2]。颐脑解郁复方是本课题组自行研制治疗PSD的中药复方，具有益肾疏肝、活血化瘀的功效，前期临床研究显示疗效显著[3]。本实验建立一种高度模拟临床PSD的大鼠模型，以探讨颐脑解郁复方对PSD大鼠行为学及海马CA1区的干预作用。
1 实验材料
1.1 动物
SPF级健康雄性SD大鼠168只，2月龄，体质量（300±20）g，北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可证号SCXK（京）2012-0001。饲养于室温（20±2）℃、相对湿度50%～60%环境，光照明暗交替12 h/12 h，自由摄食饮水。
1.2 药物及制备
颐脑解郁复方，北京中医药大学第三附属医院提供，依据前期研究[4]确定灌胃剂量为9.92 g/（kg・d），按照灌胃剂量煎药浓缩，浓度为0.62 g原药材/mL，4 ℃冰箱保存备用，用前加热；盐酸氟西汀胶囊，礼来（苏州）制药公司，批号0943A，临用时溶于蒸馏水，浓度为0.233 g/L，按照成人用量7倍计算大鼠用量为2.33 mg/（kg・d）。
1.3 主要试剂与仪器
戊巴比妥钠（美国Sigma公司，货号P3761-5），磷酸盐缓冲液（粉剂，福州迈新生物技术开发有限公司，货号PBS-0060），尼龙栓线（北京沙东生物技术有限公司，货号2838-A4），苏木素染色液（北京益利精细化学品有限公司，编号201506251323），水溶性伊红染色液（北京益利精细化学品有限公司，编号YZB/京0102-2011），返蓝染色液（北京益利精细化学品有限公司，编号2015032514324659）。旷场试验用敞箱（自制），强迫游泳试验用水箱（自制），自动化智能型正置研究级显微镜（奥林巴斯有限公司，型号BX53）。
2 实验方法
2.1 分组
大鼠实验前适应性饲养1周，采用随机数字法分为正常组24只、假手术组24只、卒中组30只、PSD组30只、西药组30只、中药组30只。正常组不干预，假手术组不插入线栓，卒中组仅进行卒中手术，PSD组、西药组和中药组均在卒中手术后1周进行PSD模型制备。自造模开始至实验结束，西药组和中药组大鼠分别灌胃氟西汀、颐脑解郁复方药液，其余各组每日灌胃等量蒸馏水。根据大鼠体质量计算氟西汀、颐脑解郁复方药液每日灌胃量，自脑卒中造模开始至实验结束，每次约3～4 mL，每日1次。
2.2 造模
参考新式线栓法[5]，制备大脑中动脉阻塞的脑卒中模型，缺血2 h后进行再灌注。入组标准：大鼠于缺血2 h后出现对侧前肢蜷曲、行走D圈或行走向对侧倒体征则纳入，无此体征或于2 h后仍不清醒者弃去。待脑卒中大鼠造模成功1周后，大鼠神经功能恢复后，将群养的PSD组、西药组、中药组大鼠分开单笼饲养至实验结束。孤养同时，每日10：00～16：00期间任取时间，将大鼠限制在特制的T型束缚台[6]（自制）上予2 h的行为限制，连续7 d。
2.3 观测方法
2.3.1 旷场试验 第2、4、8周末对各组大鼠进行旷场试验。将大鼠置于敞箱中心方格内，观察大鼠3 min内水平穿越格数（记为水平运动得分）、后肢直立次数（记为垂直运动得分）。
2.3.2 强迫游泳试验 第2、4、8周末对各组大鼠进行强迫游泳试验。大鼠禁食21 h，水箱内水深25 cm、水温（25±1）℃，连续观察5 min，记录大鼠在水中强迫游泳时间。
2.3.3 糖水偏爱试验 第2、4、8周末对各组大鼠进行糖水偏爱试验。大鼠禁食禁水20 h后，同时给予每只大鼠事先定量好的1瓶1%糖水和1瓶纯水。30 min后调换糖水和纯水的位置，60 min后取走2瓶并称量，计算大鼠糖水消耗比例。糖水偏爱度=糖水消耗量÷总液体消耗量。
2.3.4 病理观察 第2、4、8周末大鼠行为学测试后，各时点大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠（0.5 mL/100 g）麻醉，开胸暴露心脏，0.9%氯化钠溶液快速灌注，再用4%多聚甲醛先快后慢灌注固定，断头取脑，4%多聚甲醛溶液内室温固定36 h，石蜡包埋后做冠状切片，HE染色，光镜下观察海马CA1区结构变化。
3 统计学方法
采用SPSS20.0统计软件进行分析。实验数据以―x±s表示，组间比较采用方差分析，方差不齐用Welch法分析，两两比较用LSD法。P
4 结果
4.1 旷场试验结果
在2、4、8周时，同一时点PSD组大鼠与卒中组比较水平运动得分均降低，4周时差异有统计学意义（P
4.2 强迫游泳试验结果
在2、4、8周时，同一时点PSD组大鼠与卒中组比较强迫游泳时间均减少，2、4周时差异有统计学意义（P
4.3 糖水偏爱试验结果
PSD组大鼠与卒中组比较，同一时点糖水偏爱度均降低，4、8周时差异有统计学意义（P
4.4 大鼠海马CA1区病理观察结果
2周时，正常组和假手术组大鼠海马CA1区结构完整，有3～4层细胞，排列紧密，呈圆形或椭圆形，胞核、核仁清晰；卒中组大鼠海马CA1区结构尚完整，细胞较假手术组排列疏松，有2～3层细胞，细胞染色加深、核固缩，核仁不明显；PSD组大鼠海马CA1区有2～3层细胞，较卒中组更加疏松，细胞染色深、核固缩，核仁不明显，形态不规则，部分细胞呈空泡状；西药组和中药组大鼠海马CA1区结构完整，有3～4层正常细胞，排列紧密，核仁清晰，有少量细胞出现深染现象（见图1）。4周时，正常组和假手术组大鼠海马CA1区与2周时比较改变不明显；卒中组大鼠海马CA1区结构尚完整，有1～2层细胞，较正常组排列疏松，细胞染色加深、核固缩，核仁不明显；PSD组大鼠海马CA1区结构不完整，有1～2层细胞，较卒中组受损加重，大量细胞呈空泡状；西药组和中药组大鼠海马CA1区结构完整，有2～3层正常细胞，排列较紧密，有少量细胞出现深染现象，正常细胞周围出现浅粉色结构（见图2）。
8周时，正常组和假手术组大鼠海马CA1区与4周时比较变化不明显；卒中组大鼠海马CA1区结构不完整，有1～2层细胞，染色深、核固缩，核仁不明显；PSD组大鼠海马CA1区结构不完整，细胞量少，多呈空泡状；西药组和中药组大鼠海马CA1区结构完整，有1～2层正常细胞，排列较紧密，细胞呈圆形或椭圆形，核仁清晰，深染细胞较少（见图3）。
5 讨论
本实验在脑缺血模型基础上应用慢性束缚应激复合单笼饲养方法制备PSD大鼠模型，观察颐脑解郁复方对PSD大鼠行为学及海马CA1区的干预作用。实验中采用线栓法制备脑卒中模型，在充分考虑大鼠脑卒中病理基础上，选用刺激温和、量小的慢性束缚应激结合孤养的方法制备PSD大鼠模型。该模型既有脑缺血卒中和抑郁发病的病理基础，又有卒中后肢体活动受限、离开亲友等情志刺激因素，模拟了PSD发生的生物学和心理学因素[7]，操作较简单，造模成功率高，是理想的PSD大鼠模型。行为学测试结果显示，4周时可成功建立PSD大鼠模型。
海马与人类的学习及情感等认知功能密切相关，是介导应激反应的最重要的脑区之一。研究表明，PSD大鼠存在脑卒中损伤侧海马神经再生障碍，而海马神经细胞凋亡会引发一系列抑郁症状[8]。本实验观察了大鼠缺血侧海马CA1区病理变化，发现PSD组大鼠海马CA1区较卒中组受损严重，应用药物干预的西药组与中药组大鼠海马CA1区受损情况明显减轻，提示PSD加重卒中后海马CA1区受损情况，而中药颐脑解郁复方可改善海马CA1区受损情况，保护脑内神经细胞。
中医“脑髓”的现代生物学基础是脑内神经元和神经营养因子。肾主生髓，“补肾填髓”中药可减少神经元死亡，促进神经元存活与再生[9]。肝主疏泄，主藏血，具有调畅气机、调节血量的职能，脑的血供和营养依赖于肝所藏之血及肝的疏泄功能[10]。研究表明，舒肝活血中药复方能改善中风后抑郁状态[11]，并可保护脑内神经元，缓解细胞凋亡[12]。本课题组认为脑卒中多因肾虚髓海失充，元神失养致病，而后情志不遂，肝气失调，痰瘀互结，发生PSD。病位在肝肾二脏，肾虚为基础，又兼气、痰、瘀阻滞。故课题组选用补肾填精、疏肝活血中药，立颐脑解郁复方以益肾舒肝、活血化瘀、颐脑醒神。行为学及病理结果显示，颐脑解郁复方可改善大鼠PSD症状，减轻大鼠海马CA1区受损情况，保护海马CA1区细胞。
有研究表明，益肾舒肝中药复方可显著增强PSD大鼠脑内胶质纤维酸性蛋白、脑源性神经营养因子、碱性成纤维生长因子等表达[13]，参与调节PSD的多条信号通路[14-15]，但其防治机制是一个复杂的过程，目前研究尚未完全阐明。本实验从行为学和病理改变探讨颐脑解郁复方对PSD的干预作用，研究尚不深入，未来将在神经干细胞增殖分化及信号分子的变化方面加以探索。
参考文献：
[1] 韩琳，陈宁，何俐.抗抑郁药预防卒中后抑郁有效性的Meta分析[J].中国循证医学杂志，2015，15（10）：1153-1160.
[2] 白慧东，娄育红，杨国萍，等.逍遥散治疗脑卒中后抑郁疗效的Meta分析[J].中国中医药信息杂志，2010，17（9）：26-27，76.
[3] 裴清华，唐启盛，程远.益肾调气法治疗脑卒中后抑郁（血瘀型）临床研究[J].吉林中医药，2008，28（7）：487-488.
[4] 李侠，唐启盛，侯秀娟，等.脑卒中后抑郁模型大鼠脑单胺递质变化及中药颐脑解郁方的干预作用[J].中国临床康复，2006，10（47）：49-51.
[5] 范瑞娟，罗亚非，孙玉凤.新式线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立[J].中国民族民间医药，2014，31（6）：26-27.
[6] 陈家旭，李伟，赵歆，等.三种中药复方对慢性束缚应激大鼠皮层和海马BDNF、TrkB的影响[J].中国病理生理杂志，2007，23（7）：1296-1300.
[7] 谢伟坚.缺血性脑卒中后抑郁相关因素分析[J].中国医药导报，2011， 8（18）：67-68.
[8] HUANG X， MAO Y S， LI C， et al. Venlalaxine inhibits apoptosis of hippocampal neurons by up-regulating brain-derived neurotrophic factor in a rat depression model[J]. Pharmazie，2014，69：909-916.
[9] 李林，魏海峰，张兰，等.中医“肾生髓，脑为髓海”现代生物学基础探讨[J].中国中药杂志，2006，31（17）：1397-1400.
[10] 戎志斌，郭文鹏，姚乃礼.从肝论治脑病[J].中国中医药信息杂志， 2014，21（5）：114-116.
[11] 魏玖月，奚燕萍.卒中后抑郁症的中医治疗[J].中医临床研究，2013， 5（24）：109-111.
[12] 樊蔚虹，姚建平，赵文景.柴胡疏肝散对卒中后抑郁大鼠海马组织Bcl-2、Bax蛋白表达的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（3）：181-183.
[13] 唐启盛，司银楚，裴清华，等.颐脑解郁方对脑卒中后抑郁状态模型大鼠脑内GFAP、BDNF、bFGF的影响[J].北京中医药大学学报，2005，28（4）：32-35.
[14] 赵瑞珍，黄育玲，唐启盛，等.颐脑解郁方对脑出血后抑郁大鼠脑内PI-3K、Akt信号转导通路的影响[J].中医药学报，2008，36（6）：12-14.
